검사실 진단 편집하기 (부분)

==주요 검사실 검사==

*민감도가 비교적 낮은 선별검사법을 이용한 검사실 검사의 주의점

:-비록 민감도가 낮은 선별검사라 하더라도 대부분 특이도가 높은 것을 고려하여 양성으로 진단되면 감염이 있는 것으로 잠정적으로 생각한다.

:-선별검사에서 양성이면 즉각적이고 적극적인 치료를 고려한다. 

:-하지만 의학적이거나, 법률적, 혹은 정신과적 문제가 개입될 소지가 있는 환자의 경우 확진을 위한 다른 검사가 필요할 수도 있다.

:-만일 선별검사의 통계학적인 양성예측률(positive predictive ratio)이 90% 이하면 확진을 위해 다른 검사가 필요하다.

===핵산증폭검사(nucleic acid amplification test, NAAT)===

*배양검사가 어려운 미생물 감염 진단에 많이 사용되고 있다.

*성매개감염 중 임질과 클라미디아 감염을 진단하기 위해 많이 사용되며, 최근 기타 감염균에 대한 진단도 추가되어 활용되고 있다.

*모든 미생물은 자신의 독특한 염기 (DNA 혹은 단백질) 서열을 가지고 있다. 환자의 검체에서 미생물의 독특한 염기서열부분을 핵산증폭법으로 증폭하고 증폭된 산물에 대해 염기서열분석(sequencing)으로 확인하면 그 병원균이 환자에게 있다는 것을 증명할 수 있다.

*장점으로는 민감도가 매우 높고 한 검체로 여러가지 미생물을 동시에 진단이 가능하다.

*단점으로는 검사가 매우 민감하여 위양성의 가능성과 낮은 특이도로 검사 해석에 조심하여야 한다.

*국내에서도 NAAT법을 이용한 진단 검사법이 상업적으로 많이 이용되고 있다. 시행되고 있는 검사는 ''Chlamydia trachomatis''나 ''Neisseria gonorrhoeae''를 포함하여, 수 많은 종류의 미생물을 진단하고 있다.

*NAAT법은 ''C. trachomatis''와 ''N. gonorrhoeae''를 동시에 진단할 수 있는 combo 형태나 ''Mycoplasma genitalium'', ''Trichomonas vaginlis'' 등 까지 포함하는 multiplex 형태로 만들어져 상업적으로 시판되고 있다.
 
:- Polymerase chain reaction (PCR)

:- Real-time PCR

:- Ligase chain reaction (LCR)

:- Strand displacement amplification (SDA)

:- Transcription-mediated amplification (TMA)

:- Nucleic acid sequence based amplification (NASBA)

*검체

:- 비침습성 검체는 환자의 불편감을 최소화 할 수 있기 때문에 NAAT법을 이용하는 선별검사에 권장된다. 비침습성 검체로는 남성의 소변, 여성의 소변과 질도말 검체 등이 해당되며, 최근에는 피검사 스스로 채취하는 자가 질도말 검체도 NAAT법에 자주 이용되고 있다. NAAT법을 위한 검체에서 남성의 소변은 침습적인 요도검체와 동일한 민감도, 특이도를 나타냈다.<ref name="Screening for gonorrhea and Chlamydia: a systematic review for the U.S. Preventive Services Task Force.">Zakher B, Cantor AG, Pappas M, Daeges M, Nelson HD. Screening for gonorrhea and Chlamydia: a systematic review for the U.S. Preventive Services Task Force. Ann Intern Med. 2014 Dec 16;161(12):884-93.</ref>

:- 여성의 질도말 검체 또는 자가 질도말 검체는 침습적인 자궁경부 도말검체와 동일한 민감도, 특이도를 나타냈다. 하지만 여성의 소변검체는 검체의 양과 방법에 따라 낮은 민감도를 보일 수도 있으므로, 주의를 요한다.<ref name="Screening for gonorrhea and Chlamydia: a systematic review for the U.S. Preventive Services Task Force.">Zakher B, Cantor AG, Pappas M, Daeges M, Nelson HD. Screening for gonorrhea and Chlamydia: a systematic review for the U.S. Preventive Services Task Force. Ann Intern Med. 2014 Dec 16;161(12):884-93.</ref>

 A NAAT법을 위한 남성의 검체는 비침습적인 첫소변 검체가 권장된다.
 A NAAT법을 위한 여성의 검체로 비침습적인 질도말, 자가 질도말, 첫소변 검체가 이용될 수 있지만 소변검체는 민감도가 낮아질 수 있다.

*검사 시 주의사항

:- 검체 채취 때 검사자 혹은 주위 환경에 의해 오염될 가능성이 있다. 주위 환경을 자주 청소하고, 검체 채취 때 일회용 장갑을 착용하여 검사자가 매개가 된 오염 가능성을 최소화 시킨다.

:- 검체가 소변인 경우 반드시 소독된 일회용 컵을 사용하여야 하고, 이송용기에 조심해서 옮겨 담는다. 

:- 검체에 적혈구 혹은 다양한 오염물질은 핵산증폭을 방해하여 위음성의 가능성을 초래한다. 출혈이 있으면 거즈로 출혈을 제거한 후 검체를 채취한다.

:- 검사실은 검체에서 핵산을 추출함에 있어서 최대한 효율이 높은 방법을 이용하여 많은 양의 DNA를 추출해야 한다. 또한 많은 검체들 간의 교차오염(cross contamination)의 가능성에 주의를 하여야 한다. 증폭을 시행할 때 양성대조군, 음성대조군을 포함 시키고, 검사의 결과에 신뢰가 되지 않으면 즉시 검사 의뢰자에게 연락하여 재검사를 요청하여야 한다.

:- 성폭행 등과 같이 법률적인 문제가 있는 경우 성매개감염 검사를 시행한 후 남은 검체를 -70℃에 보관한다.

:- NAAT법에서 양성이란 의미는 그 검체에 그 성병균의 핵산이 존재한다는 의미로 약물 치료로 균이 죽어도 일정한 시간 동안 양성으로 검출될 수 있다.

:- 즉 NAAT법으로는 살아있는 균과 죽은 균을 감별할 수 없으며, 치료 후 재발이나 약물 내성 등을 확인하기 위해 살아 있는 균을 진단하려면 배양검사가 필요하다.

===실시간중합효소연쇄반응(real-time PCR)===

*실시간중합효소연쇄반응(real-time PCR)은 중합효소연쇄반응 이후 전기영동 또는 부합반응과 같은 추가과정 없이 분석이 가능하므로 기존 중합효소연쇄반응보다 증폭산물에 의한 오염 가능성이 개선되고 검사소요시간도 단축되는 장점을 가진 방법이다. 또한 한쌍의 시발체와 소식자가 함께 사요외어 비특이적 반응이 감소되고 특이도가 향상되는 방법이다. 중합효소연쇄반응은 아가로오즈겔에 전기영동하여 결과를 판독하므로, 약양성의 경우 양성 또는 음성에 대한 객관적인 판독이 어려운 점이 있으며, 이런 문제점은 특히 증폭산물의 크기가 작은 경우에 심각하다. 반면에 실시간중합효소연쇄반응은 증폭곡선과 Ct(threshold cycle) 값을 객관적인 지표로 삼아 판독하므로 결과판독에 있어서 주관적인 판단을 배제할 수 있다. 따라서 자동화된 실시간중합효소연쇄반응은 기존 중합효소연쇄반응의 장점인 높은 민감도를 그대로 가지면서 실험실 내 교차오염 등의 문제점을 해결할 수 있는 효과적인 검사방법이다.<ref name="Henry’s clinical diagnosis and management by laboratory methods.">Henry’s clinical diagnosis and management by laboratory methods. 22nd ed., Richard A. McPherson and Matthew R. Pincus, Elsevier, 2011;pp1274-5. </ref><ref name="진단검사의학 제5판">진단검사의학 제5판, 대한진단검사의학회편, 범문에듀케이션, 2014;p532 and p1012. </ref><ref name="The power of real-time PCR.">Valasek MA, Repa JJ. The power of real-time PCR. Adv Physiol Educ. 2005 Sep;29(3):151-9. </ref><ref name="Usefulness of a novel multiplex real-time PCR assay for the diagnosis of sexually-transmitted infections.">Fernández G, Martró E, González V, Saludes V, Bascuñana E, Marcó C, Rivaya B, López E, Coll P, Matas L, Ausina V. Usefulness of a novel multiplex real-time PCR assay for the diagnosis of sexually-transmitted infections. </ref>

*성매개감염에 대한 다중 실시간중합효소연쇄반응과 기존 중합효소연쇄반응과의 비교연구에서는 실시간 중합효소연쇄반응이 기존의 검사방법들보다 동일하거나 더 효율적이었다.<ref name="Performance of Anyplex™ II multiplex real-time PCR for the diagnosis of seven sexually transmitted infections: comparison with currently available methods.">Choe HS, Lee DS, Lee SJ, Hong SH, Park DC, Lee MK, Kim TH, Cho YH. Performance of Anyplex™ II multiplex real-time PCR for the diagnosis of seven sexually transmitted infections: comparison with currently available methods. Int J Infect Dis. 2013 Dec;17(12):e1134-40. </ref>

 B 실시간 중합효소연쇄반응과 중합효소연쇄반응 검사는 성매개감염 진단에 있어서 모두 높은 민감도와 특이도를 가지고 있다. 
 B 특히 실시간중합효소연쇄반응은 자동화 된 정량적인 분석을 통해 중합효소연쇄반응에서 나타날 수 있는 오염에 의한 검사오류를 최소화 할 수 있다.

===배양검사===

*모든 미생물은 그 미생물이 자라기 위해서 다양한 물질이 필요하다. 즉 다양한 미생물을 배양하기 위해서는 그 미생물이 자라기 위한 영양소를 배양액에 공급하여야 한다.
 
*미생물은 액체상태인 배양액에서 자라거나 고체배지에서 자란다. 또한 혼자서는 생존할 수가 없어 feeder cell이 필요하기도 한다. 

*예를 들면 임균인 경우 고체배지인 배양판에서 잘 자라지만 클라미디아 같은 균은 HeLa cell과 같은 feeder cell이 필요할 정도로 배양하기 무척어렵고, 시간과 비용이 많이 들며 올바른 검사 결과를 위해서는 많은 경험이 필요하다.

*이러한 이유로 최근에는 간편한 NAAT법이 많이 사용되고 있지만 약제 내성을 관찰하기 위해서 혹은 성폭행 같은 법적인 문제가 있는 경우, 구강이나 항문에서 추출한 검사 시료인 경우 여전히 배양검사가 우선시 되고 있다.